İkisi de Mikroplaka okuyucu ve spektrofotometre laboratuvarda yaygın olarak kullanılan analiz ve ölçüm araçlarıdır. Ölçüm prensipleri aynıdır ve her ikisi de numunenin absorbansını ölçmek için Lambert-Beer yasasını kullanır. Bu makale aralarındaki farkı tanıtacaktır.
1. Mikroplaka okuyucu ile spektrofotometre arasındaki üç önemli fark
Mikroplaka okuyucu, enzim bağlantılı immünosorbent tespit cihazıdır. Mikroplaka dedektörü olarak da bilinen enzim bağlantılı immünosorbent deneyi için bir cihazdır. Basitçe yarı otomatik ve tam otomatik olarak ayrılabilir. Ancak çalışma prensipleri aynıdır ve özleri, analiz için kolorimetri kullanan bir kolorimetredir. Belirleme genellikle test çözeltisinin son hacminin 250 μL'nin altında olmasını gerektirir ve test genel bir fotoelektrik kolorimetre ile tamamlanamaz, bu nedenle mikroplaka okuyucuda fotoelektrik kolorimetre için özel gereksinimler vardır.
Spektrofotometre, spektrum olarak da bilinir, karmaşık ışığı spektral çizgilere ayrıştıran bilimsel bir araçtır. Ölçüm aralığı genellikle 380-780 nm dalga boyu aralığına sahip görünür ışık bölgesini ve 200-380 nm dalga boyu aralığına sahip ultraviyole ışık bölgesini içerir. Farklı ışık kaynaklarının kendine özgü emisyon spektrumları vardır, bu nedenle farklı aydınlatıcılar cihazın ışık kaynağı olarak kullanılabilir.
Benzer şekilde laboratuvarlarda absorbans ölçümü için kullanılan mikro plaka okuyucular ile spektrofotometreler arasında da bazı farklılıklar bulunmaktadır ve bu farklılıklar aşağıdaki üç açıdan görülmektedir:
(1) Test edilecek çözeltiyi içeren kap
Spektrofotometre bir küvet kullanır ve mikro plaka okuyucusu plastik bir mikro plaka (mikro plaka) kullanır. Küvet yalnızca çözeltiyi içerme rolünü oynayabilir ve her küvet aynı anda yalnızca bir çözelti tutabilir. ELISA plakası genellikle antijenler ve antikorlar üzerinde güçlü bir adsorpsiyon etkisi olan şeffaf polietilen malzemeden yapılır, bu nedenle katı faz taşıyıcısı olarak kullanılır. Bir mikrotitre plakası genellikle 48 kuyulu veya 96 kuyuludur ve her mikro kuyu farklı bir çözelti tutabilir.
(2) Işık yolunun yönü
Bir spektrofotometre (https://www.drawellanalytical.com/spectrophotometer/) yatay bir ışık yoluna sahipken, bir mikro plaka okuyucusu dikey bir ışık yoluna sahiptir. Mikro plaka plakasında numuneleri içeren plastik mikro plaka çok sıralı gözenekli olduğundan, ışık yalnızca dikey olarak geçebilir, bu nedenle mikro plaka okuyucusunun ışını test edilecek çözeltiden ve mikro plakadan dikey olarak geçer. Ayrıca, ışın yukarıdan aşağıya doğru olabilir veya kolorimetrik çözeltiden aşağıdan yukarıya doğru geçebilir. Dikey ışığın özelliği, numunenin absorbansının sıvının konsantrasyonundan veya seyreltmesinden daha az etkilenmesidir. Dezavantajı, test edilecek numunenin sıvı seviyesinin düz olup olmamasından, mikro plaka plakasının ışık geçirgenliğinden ve kuyunun tabanının düz olup olmamasından büyük ölçüde etkilenmesidir.
(3) Optik yolun uzunluğu
Çünkü optik yoğunluk (OD değeri) emilim katsayısı, ölçülecek bileşenin konsantrasyonu ve optik yol uzunluğu ile doğru orantılıdır.
Spektrofotometrede kullanılan küvetin genişliği genellikle 1 cm olduğundan optik yol uzunluğu 1 cm'de sabitlenmiştir. Bu nedenle farklı cihazlar ve farklı partiler tarafından ölçülen veriler aynı karşılaştırılabilirliğe sahiptir.
Mikroplaka okuyucu dikey bir optik yol kullanır, bu nedenle optik yolun uzunluğu sıvı yüzeyinin yüksekliği olmalıdır. Bu nedenle ölçülen değer numunenin hacmi tarafından etkilenir.
2. Mikroplaka okuyucu ve spektrofotometrenin avantaj ve dezavantajlarının karşılaştırılması
Spektrofotometre
Avantajları:
1). Tespit dalga boyu aralığı geniştir.
2). Eklenen numune miktarındaki tutarsızlıklar ölçüm sonuçlarını etkilemez.
Dezavantajları:
1). Ağır iş yükü, zahmetli çalışma ve zaman alıcıdır.
2). Reaktif tüketimi.
3). Zayıf sonuç kararlılığı, zayıf tekrarlanabilirlik ve büyük hata.
4) Maddelerin tespiti ve izlenmesi zordur.
Başlıca uygulama alanları: İlaç muayenesinde maddelerin nitel ve nicel analizi, ilaç analizi, çevre testleri, sağlık ve salgın önleme, gıda, kimya endüstrisi, bilimsel araştırma ve diğer alanlar.
Mikroplaka okuyucu
Avantajları:
1). Çok sayıda numune aynı anda işlenebildiğinden zamandan tasarruf edilir.
2). Daha az numune ve reaktif kullanılır.
3). Basit kullanım, iyi tekrarlanabilirlik, hızlı tespit hızı ve yüksek verimlilik.
Dezavantajları:
1). Mikroplaka okuyucunun 96-kuyulu plakası, ultraviyole bölgesinde güçlü ultraviyole emilimine sahiptir, bu nedenle 300 nm'nin altındaki içerik belirlemelerinde mikroplaka okuyucuyu kullanmaktan kaçının.
2). Mikroplakadaki her kuyucuğa eklenen numune miktarının kesinlikle tutarlı olduğundan emin olmak gerekir; bu da deneycinin çalışma becerileri için daha yüksek gereksinimleri ortaya koyar.
Başlıca uygulama alanları: Klinik testler, biyolojik araştırmalar, tarım bilimi, gıda ve çevre bilimi vb.
