Hem PCR hem de qPCR, DNA'nın belirli bölümlerini çoğaltmak için kullanılan polimeraz zincir reaksiyonu teknikleridir. İkisi arasındaki fark, qPCR'nin gerçek zamanlı tespit yöntemi olması, PCR'nin ise olmamasıdır.
Bu, qPCR ile hedef DNA'nızın amplifikasyonunu gerçekleştiği anda gerçek zamanlı olarak izleyebileceğiniz anlamına gelir. Bu kılavuz size PCR ve qPCR'nin ne olduğunu ve aralarındaki farkın ne olduğunu tanıtacaktır.
Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PCR) Ne Yapar?
PCR (polimeraz zincir reaksiyonu), Kary Mullis tarafından 1980'li yıllarda geliştirilen bir laboratuvar tekniği olup, günümüzde küçük miktarlardan büyük miktarda DNA elde etmek için kullanılmaktadır.
PCR, DNA dizileme, patojen tespiti ve jel elektroforezi gibi diğer işlemlerde sıklıkla kullanılan bir adımdır. PCR, viroloji, mikrobiyoloji, parazitoloji, okült ve diğer alanlarda sıklıkla kullanılan önemli bir tanı tekniğidir. ve dişler
Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR), belirli bir DNA segmentinin birden fazla kopyasını yapmak için kullanılan bir yöntemdir. İşlem, daha sonra polimeraz adı verilen bir enzim tarafından kopyalanan az miktarda şablon DNA ile başlar. Çoğaltma miktarı, DNA ipliklerini ayırarak tekrar çoğaltabilmelerini sağlayan tekrarlanan ısıtma ve soğutma döngüleri ile artırılabilir.
PCR'nin son ürünü, hedef DNA dizisinin çok sayıda özdeş kopyasıdır. Ürün daha sonra dizileme veya Southern blotting gibi daha ileri analizler ve analizler için kullanılabilir. PCR ayrıca mRNA şablon moleküllerinden cDNA hazırlamak için de kullanılabilir.
Ters Transkripsiyon PCR'nin İşlevi Nedir?
Ters transkripsiyon PCR (RT-PCR), mRNA şablon moleküllerinden cDNA hazırlamak için kullanılan bir PCR testidir. RT-PCR, HIV ve hepatit C virüsü gibi RNA virüslerini tespit etmek ve ölçmek için yaygın olarak kullanılır.
RT-PCR gerçekleştiriyorsanız, önce mRNA şablonunu ters transkriptaz kullanarak cDNA'ya ters transkribe etmeniz gerekir. Daha sonra hedef cDNA dizinizi çoğaltmak için PCR kullanabilirsiniz. RT-PCR analizi, bir örnekte çok düşük seviyelerde RNA virüslerini tespit edebilen çok hassas bir virüs tespit yöntemidir.
qPCR, gen ifadesini ölçme yeteneğiyle öne çıkıyor. Gen ifadesinde, DNA'nın bir bölümü okunduğunda mRNA sentezlenir, mRNA daha sonra protein üretmek için kullanılır.
Ters transkripsiyon sürecinde, ters transkriptaz kullanılarak çalışılan RNA'nın kopyaları olacak tamamlayıcı DNA (cDNA) oluşturulabilir. Daha sonra üretilen miktarın doğru ölçümlerini elde etmek için cDNA üzerinde qPCR gerçekleştirilir.
RNA, PCR ve qPCR ile tespit edilebilir ve PCR için RNA kullanılırsa buna RT-PCR, qPCR tespiti için RNA kullanılırsa buna qRT-PCR adı verilir.
qPCR Analizörü (gerçek zamanlı PCR) Nedir?
Kantitatif polimeraz zincir reaksiyonu (qPCR), PCR'ye çok benzerdir ancak aynı zamanda bir örnekte bulunan hedef DNA miktarını ölçmenize de olanak tanır. qPCR, amplifikasyon sırasında hedef DNA'ya bağlanan floresan boyaların veya probların eklenmesini içerir. Bu problar, bir lazer tarafından uyarıldığında farklı dalga boylarında ışık yayar.
Her dalga boyunda yayılan ışığı ölçerek, amplifikasyon başlamadan önce numunede ne kadar hedef DNA bulunduğunu belirleyebilirsiniz. qPCR ayrıca, zaman içinde floresandaki değişiklikleri ölçerek amplifikasyon ilerlemesinin gerçek zamanlı olarak izlenmesini sağlar.
PCR ve qPCR Arasındaki Fark
PCR ve qPCR arasındaki temel fark, qPCR'nin gerçek zamanlı bir yöntem olması, PCR'nin ise olmamasıdır. Bu, qPCR kullanırsanız hedef DNA'nın amplifikasyonunu gerçek zamanlı olarak izleyebileceğiniz anlamına gelir.
İki yöntem arasındaki bir diğer fark ise qPCR'nin floresan boyalar veya problar kullanılmasını gerektirmesi, PCR'nin ise gerektirmemesidir. Bu problar, bir örnekte bulunan hedef DNA miktarını ölçmenize olanak tanır.
PCR, genellikle dizileme veya diğer alt akış uygulamaları için DNA'yı çoğaltmak amacıyla kullanılır.
qPCR, RNA virüslerini tespit etmek ve miktarını belirlemek için yaygın olarak kullanılır.
RT-PCR, mRNA şablon molekülünden cDNA hazırlamak için kullanılan bir PCR türüdür.
PCR ve qPCR'nin uygulamaları ve kullanımları
polimeraz zincirleme reaksiyonu
PCR, virüsün tespitini sağlayan nispeten basit bir işlemdir. DNA'nın varlığı veya yokluğu. PCR, yaratıldığı günden bu yana adli tıp, tıp ve biyoteknoloji dahil olmak üzere birçok farklı alanda kullanılmıştır. Dizileme veya diğer alt akış uygulamaları için küçük DNA parçalarını çoğaltmak için sıklıkla kullanılır.
PCR, aynı zamanda mRNA şablon moleküllerinden cDNA hazırlamak için de kullanılabilir.
Kantitatif PCR
qPCR, reaksiyon hızını ölçen gerçek zamanlı veriler sağlar, belirli bir zamanda bir numunede bulunan DNA miktarı hakkında bilgi verir, esasen gen ekspresyon hızını ölçer.
Moleküler biyolojide bu, protein sentezini ve sağlık ve hastalıktaki biyolojik yolları anlamaya yardımcı olur. Gerçek zamanlı veya qPCR, gen ifadesini, patojenlerin ve RNA'nın varlığını ve miktarını tespit etmek ve DNA mikrodizi sonuçlarının ve çevresel uygulamaların doğrulanması için kullanılabilir.
qPCR, aynı kuyuda geniş bir ifade seviyesi aralığını tespit edebildiği için yüksek verim ve daha geniş dinamik aralık avantajına sahiptir. Çoklu işlem yetenekleri sayesinde, aynı deneyde birden fazla hedef çoğaltılabilir, yüksek verim ve hızlı sonuçlar, daha ekonomik olarak çalıştırılabilir.
RT-PCR,
RT-PCR, bir mRNA şablon molekülünden cDNA hazırlamak için kullanılan bir PCR türüdür. RT-PCR, HIV ve hepatit C virüsleri gibi RNA virüslerini tespit etmek ve ölçmek için yaygın olarak kullanılır.
Hem PCR hem de qPCR, birçok farklı uygulamaya sahip temel yöntemlerdir.
ÖZET
Özetle, hem PCR hem de qPCR, spesifik DNA parçalarını çoğaltmak için kullanılan yöntemlerdir.
Ancak qPCR, hedef DNA'nın amplifikasyonunu gerçek zamanlı olarak izlemenize olanak tanıyan gerçek zamanlı bir yöntemdir, PCR ise bunu yapmaz. Sonuç olarak, her iki yöntem de daha fazla analiz için hedef DNA dizisinin birden fazla kopyasını oluşturmak için kullanılabilir.
qPCR, nükleik asit amplifikasyonu, karakterizasyonu, kantifikasyonu ve analizi için en iyi seçimdir. Floresan boyalarla çalışır ve optik tekniklerle kullanım için idealdir, bu nedenle iyi kalitede, berrak mikro plakalar ve membranlar şarttır.
PCR ayrıca jel elektroforezi gibi sonraki analizler için kısa DNA dizilerini çoğaltmak ve tespit etmek için kullanılır. PCR optik uygulamalar için kullanılmadığından mikro plakalar ve filmlerin şeffaf olması gerekmez. PCR ürün yelpazemize göz atın.
Ancak uzun vadeli güvenilirlik ve dayanıklılık için yüksek kaliteli mikro plakaların seçilmesi önerilir.
Daha fazla tavsiye ve destek için Drawell ekibi hizmetinizdedir, lütfen İletişim bilgi için.
