Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi (HPLC) aynı zamanda yüksek basınçlı, yüksek hızlı, modern sıvı kromatografisi olarak da adlandırılır. 1960'ların ortalarında bileşikleri ayırmak için etkili ve hızlı bir yöntem olarak kurulmuştur. 1970'lerin sonlarında proteinlerin ayrılması ve saflaştırılmasında yaygın olarak kullanılmıştır. Proteinleri ayırmak ve saflaştırmak için en etkili yöntemlerden biri haline gelmiştir. HPLC'ye gelince, yüksek ayırma verimliliğine sahiptir, bu nedenle son derece etkili bir kromatografik kolona ihtiyaç vardır. HPLC, yüksek basınçlı infüzyon pompası nedeniyle yüksek hıza sahiptir. Yüksek hassasiyetli dedektör nedeniyle yüksek hassasiyete ve yüksek doğruluğa sahiptir. HPLC, GC ve klasik atmosferik kromatografi arasındaki fark nedir?
Warasındaki fark nedir HPLC ve GC?
İşte, aralarındaki farkı anlamanıza yardımcı olacak altı özellik: yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) ve gaz kromatografisi (GK).
| Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi (HPLC) | Gaz Kromatografisi (GC) |
| 1. Hemen hemen her türlü madde analiz edilebilir 2. Termal olarak kararsız maddelerin analizi için uygundur 3. Kromatografik kolon, gaz kromatografik kolon kadar uzun değildir ve kolon verimliliği GC kapiler kolon kadar yüksek değildir 4. Gaz kromatografisinde olduğu gibi çok sayıda sabit faz türü yoktur ve seçicilik esas olarak hareketli faz değiştirilerek değiştirilir. 5. Mobil faz, toksik olan organik bir çözücüdür. 6. Numune kantitatif olarak geri kazanılabilir ve aynı zamanda preparat amacıyla da kullanılabilir. | 1. Sadece uçucu maddeler veya yüksek sıcaklıklarda buharlaşabilen maddeler analiz edilebilir 2. Termal olarak kararsız maddelerin analizi için uygun değildir 3. Kapiler kolon kromatografisi ile yüksek kolon verimliliği elde edilebilir. 4. Taşıyıcı gaz dağılımı etkilemez. Genellikle seçicilik, sabit fazın veya kolonun sıcaklığı değiştirilerek değiştirilir. 5. Mobil faz gazdır, toksik değildir.6. Numune kurtarmada zorluk |
WHPLC arasındaki fark nedir? ve klasik atmosferik kromatografi mi?
HPLC, klasik atmosferik kromatografiye göre temel olarak şu özelliklere sahiptir:
1. HPLC ile proteinlerin ayrılması ve saflaştırılması hızlıdır.
Genellikle yarım saatte bir yapılabilir, bu da proteinin saflaştırılması için gereken süreyi büyük ölçüde kısaltır.
2. Yüksek çözünürlük
10 cm uzunluğundaki kromatografik kolon bir düzineden fazla maddeyi ayırabilir ve yüksek verimli faz kromatografik kolon tekrar tekrar kullanılabilir.
3. Geniş uyarlanabilirlik ve güçlü esneklik
Neredeyse tüm proteinler, izoelektrik nokta, hidrofobisite, molekül ağırlığı, yük dağılımı vb. gibi özelliklerindeki farklılıklara göre farklı HPLC yöntemleriyle ayrılabilmekte ve saflaştırılabilmektedir.
4. Yüksek hassasiyet
HPLC artık ultraviyole, floresans, iletkenlik vb. gibi çeşitli yüksek hassasiyetli dedektörlerde yaygın olarak kullanılmaktadır. Floresans duyarlılığı 10-9g'a kadar çıkmaktadır.
5. İyi tekrarlanabilirlik
Protein analiz testinin analizinde hata genellikle %5’i geçmez.
6. Geniş çeşitlilikte ayırma ve saflaştırma
Biyolojik alanda aşağıdaki ürünlerin ayrılması ve tanımlanmasında yaygın olarak kullanılır: amino asitler ve türevleri, organik asitler, steroidler, alkaloitler, antibiyotikler, karbonhidratlar, porfirinler, nükleik asitler ve bunların bozunma ürünleri, proteinler, enzimler ve peptitler, lipitler, vb.
Bu nedenle HPLC, protein ayırma ve saflaştırmada son derece önemli bir konuma sahiptir. Elbette HPLC'nin de eksiklikleri vardır. Örneğin, ekipman pahalıdır. Rekabetçi bir fabrika fiyatına yüksek performanslı sıvı kromatografisi elde etmek istiyorsanız, Çizimll en iyi seçeneğiniz olabilir. Hazırlayıcı kolonlar kullanılmış olsa da, hazırlama miktarı hala sınırlıdır. Bazı yöntemlerde, organik çözücülerin kullanımı proteinlerin aktivitesini etkileyecektir.
Sonuç olarak, yüksek performanslı sıvı kromatografisi artık proteinleri ayırma ve saflaştırmada çok etkili bir yöntem haline gelmiş olup, biyolojik bilimler alanında önemli bir ayırma ve analiz teknolojisidir.
